更新時間:2024-07-05
嘔吐毒素檢測試劑盒采用間接競爭ELISA方法檢測大米、小米、面等谷物及飼料樣本中的嘔吐毒素(Deoxynivalenol,DON),試劑盒由預(yù)包被偶聯(lián)抗原的酶標(biāo)板、辣根酶標(biāo)記物、抗體、標(biāo)準(zhǔn)品及其他配套試劑組成。
品牌 | 其他品牌 | 貨號 | YZ-R3155 |
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規(guī)格 | 96T | 供貨周期 | 現(xiàn)貨 |
應(yīng)用領(lǐng)域 | 食品,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè),制藥 |
嘔吐毒素檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫法)使用說明書:
1、原理及用途:
脫氧雪腐鐮刀菌烯醇又稱嘔吐毒素,由禾谷鐮刀菌產(chǎn)生,常出現(xiàn)在玉米(穗腐病)、小麥和大麥(赤霉病)上。我國谷物中DON的標(biāo)準(zhǔn)為1.0mg/kg。
本試劑盒采用間接競爭ELISA方法檢測大米、小米、面等谷物及飼料樣本中的嘔吐毒素(Deoxynivalenol,DON),試劑盒由預(yù)包被偶聯(lián)抗原的酶標(biāo)板、辣根酶標(biāo)記物、抗體、標(biāo)準(zhǔn)品及其他配套試劑組成。檢測時,加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣本溶液,樣本中的嘔吐毒素和酶標(biāo)板上預(yù)包被偶聯(lián)抗原競爭抗嘔吐毒素抗體,加入酶標(biāo)記物后,用TMB底物顯色,樣本吸光度值與其所含嘔吐毒素含量成負(fù)相關(guān),與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較即可得出樣本中嘔吐毒素的殘留量。
2、技術(shù)指標(biāo):
2.1、試劑盒靈敏度:10ppb(ng/ml)
2.2、反應(yīng)模式:25℃,30~15min
2.3、檢測下限:
谷物、飼料…………………………………200ppb
2.4、交叉反應(yīng)率:
嘔吐毒素……………………………………100%
3-乙?;撗跹└牭毒┐?#8230;…………<1%
2.5、樣本回收率:
谷物、飼料……………………………85%±15%
3、試劑盒組成:
酶標(biāo)板………………………………………96孔
標(biāo)準(zhǔn)品(黑蓋):各1ml
0ppb、10ppb、30ppb、90ppb、270ppb、810ppb
酶標(biāo)記物(紅蓋)…………………5.5ml
抗體工作液(藍(lán)蓋) ………………5.5ml
底物液A(白蓋)……………………6ml
底物液B(黑蓋)……………………6ml
終止液(黃蓋)………………………6ml
20×濃縮洗滌液(白蓋)……………40ml
復(fù)溶液(黃蓋)………………………50ml
說明書…………………………………1份
蓋板膜…………………………………1張
自封袋…………………………………1個
4、需要的器材和試劑:
4.1、儀器:酶標(biāo)儀、打印機(jī)、均質(zhì)器、振蕩器、離心機(jī)、刻度移液管、天平(感量0.01g)
4.2、微量移液器:單道20µl-200µl,100µl-1000µl、多道300µl
5、樣本前處理:
5.1、樣本處理前須知:
實驗器具必須潔凈并使用一次性吸頭,以避免污染干擾實驗結(jié)果
5.2、配液:
配液1:工作洗滌液
將濃縮洗滌液20倍稀釋(1份洗滌液加19份去離子水)
5.3、樣本前處理步驟:
5.3.1、谷物(大米、玉米、小米、麥麩等)及飼料處理方法
1)稱取2g±0.05g粉碎樣本于50ml離心管中,加20ml去離子水,振蕩5分鐘,室溫4000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘
2)取0.5ml上清,加入0.5ml復(fù)溶液,混勻
3)取50µl進(jìn)行分析
樣本稀釋倍數(shù):20,檢測下限:200ppb
注:由于毒素在樣本中的分布呈非均勻狀態(tài),取樣時需多點取樣充分混勻后再取2g進(jìn)行試驗
6、酶聯(lián)免疫試驗步驟:
將所需試劑從4℃冷藏環(huán)境中取出,置于室溫平衡30min以上,洗滌液冷藏時可能會有結(jié)晶需恢復(fù)到室溫以充分溶解,每種液體試劑使用前均須搖勻。取出需要數(shù)量的微孔板及框架,將不用的微孔板放入自封袋,保存于2-8℃
6.1、編號:將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對應(yīng)微孔按序編號,每個樣本和標(biāo)準(zhǔn)品做2孔平行,并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔所在的位置
6.2、加樣反應(yīng):加標(biāo)準(zhǔn)品或樣本50µl/孔到各自的微孔中,然后加酶標(biāo)記物50µl/孔,再加入50µl/孔的抗體工作液,用蓋板膜封板,輕輕振蕩5秒混勻,25℃反應(yīng)30分鐘
6.3、洗滌:小心揭開蓋板膜,甩去孔內(nèi)液體,每孔加350µl工作洗滌液,靜置30秒后棄去,重復(fù)洗滌5次,最后一次拍干(用吸水紙拍干,拍干后未被清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破)
6.4、顯色:每孔加入底物液A50µl,再加底物液B50µl,輕輕振蕩5秒混勻,25℃避光顯色15分鐘(若藍(lán)色過淺,可適當(dāng)延長反應(yīng)時間)
6.5、終止:每孔加入終止液50µl,輕輕振蕩混勻,終止反應(yīng)
6.6、測吸光值:用酶標(biāo)儀于450nm處測定每孔吸光度值(建議用雙波長450/630nm)。測定應(yīng)在終止反應(yīng)后10分鐘內(nèi)完成
7、結(jié)果分析:
7.1、百分吸光率的計算:
標(biāo)準(zhǔn)液或樣本的百分吸光率等于標(biāo)準(zhǔn)液或樣本的百分吸光度值的平均值(雙孔)除以第一個標(biāo)準(zhǔn)液(0ppb)的吸光度值,再乘以100%,即
百分吸光度值(%)=A/A0×100%
A—標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值
A0—0ppb標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值
7.2、標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制與計算:
以標(biāo)準(zhǔn)液百分吸光率為縱坐標(biāo),對應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)液濃度(ppb)的對數(shù)為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)液的半對數(shù)曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中,從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣本所對應(yīng)的濃度,乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中待測物的實際濃度
若利用試劑盒專業(yè)分析軟件進(jìn)行計算,更便于大量樣本的準(zhǔn)確、快速分析(歡迎來電索取)
8、注意事項:
8.1、室溫低于25℃或試劑及樣本沒有回到室溫(25℃)會導(dǎo)致所有標(biāo)準(zhǔn)的OD值偏低
8.2、在洗板過程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況,則會出現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)曲線不成線性,重復(fù)性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應(yīng)立即進(jìn)行下一步操作
8.3、混合要均勻,洗板要che底,在ELISA分析中的再現(xiàn)性,很大程度上取決于洗板的一致性
8.4、在所有孵育過程中,用蓋板膜封住微孔板,避免光線照射
8.5、不要使用過了有效期的試劑盒,不要交換使用不同批號試劑盒中的試劑
8.6、顯色液若有任何顏色表明變質(zhì),應(yīng)當(dāng)棄之。0標(biāo)準(zhǔn)的吸光度值小于0.5個單位(A450nm< 0.5 )時,表示試劑可能變質(zhì)
8.7、反應(yīng)終止液有腐蝕性,避免接觸皮膚
9、嘔吐毒素檢測試劑盒貯藏及保存期:
儲藏條件:試劑盒于2-8℃保存,避免冷凍。
保質(zhì)期:該產(chǎn)品有效期為1年,生產(chǎn)日期見包裝盒。