更新時(shí)間:2024-07-05
甲型流感病毒核酸檢測(cè)試劑盒的原理是通過(guò)擴(kuò)增病毒基因組中的特定區(qū)域,將其轉(zhuǎn)化為可以檢測(cè)的數(shù)量級(jí),并使用熒光探針或其他方法檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物的存在與否。
品牌 | 其他品牌 | 貨號(hào) | YZ-P3566 |
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規(guī)格 | 50T | 供貨周期 | 現(xiàn)貨 |
主要用途 | 僅供科研 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產(chǎn)業(yè),制藥,綜合 |
甲型流感病毒核酸檢測(cè)試劑盒的原理是通過(guò)擴(kuò)增病毒基因組中的特定區(qū)域,將其轉(zhuǎn)化為可以檢測(cè)的數(shù)量級(jí),并使用熒光探針或其他方法檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物的存在與否。具體來(lái)說(shuō),該測(cè)試劑盒通常使用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)技術(shù),利用逆轉(zhuǎn)錄酶將病毒RNA轉(zhuǎn)錄成相應(yīng)的DNA,在PCR過(guò)程中,使用特異性引物擴(kuò)增目標(biāo)DNA序列,結(jié)合熒光探針進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量檢測(cè)。如果樣本中存在甲型流感病毒的DNA,則會(huì)產(chǎn)生熒光信號(hào),證明樣品呈陽(yáng)性結(jié)果。
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試劑組成:
包裝規(guī)格 | 50T/盒 |
反應(yīng)液 | 500μL×2管 |
酶液 | 50μL×1管 |
陽(yáng)性質(zhì)控品 | 50μL×1管 |
陰性質(zhì)控品 | 250μL×1管 |
說(shuō)明:不同批號(hào)的試劑盒組分不可交互使用。
儲(chǔ)存條件及有效期:
-20℃±5℃,避光保存、運(yùn)輸、反復(fù)凍融次數(shù)不超過(guò)5次,有效期12個(gè)月。
適用儀器:
ABI、安捷倫MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf等系列熒光定量PCR檢測(cè)儀。
標(biāo)本采集:
適用于人體的血液、體液和棉拭子等多種樣本。
保存和運(yùn)輸:
上述標(biāo)本短期內(nèi)可保存于-20℃,長(zhǎng)期保存可置-70℃,但不能超過(guò) 6 個(gè)月,標(biāo)本運(yùn)送應(yīng)采用 2~8℃冰袋運(yùn)輸,嚴(yán)禁反復(fù)凍融。
甲型流感病毒核酸檢測(cè)試劑盒使用方法:
1. 樣品處理(樣本處理區(qū))
1.1樣本前處理
血液、體液和棉拭子樣本取100μL于1.5mL滅菌離心管中。
1.2核酸提取
推薦采用上海研尊生物科技有限公司生產(chǎn)的核酸提取或純化試劑(磁珠法或離心柱法)進(jìn)行核酸提取, 請(qǐng)按照試劑說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。
2. 試劑配制(試劑準(zhǔn)備區(qū))
根據(jù)待檢測(cè)樣本總數(shù),設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為 N(N=樣本數(shù)+1管陰性對(duì)照+1管陽(yáng)性對(duì)照;反應(yīng)管數(shù)每滿10份,多配制1份),每測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表:
試劑CB反應(yīng)液酶液用量(樣本數(shù)為N) 20μL,1μL將混合好的測(cè)試反應(yīng)液分裝到PCR反應(yīng)管中,21μL/管。
3. 加樣(樣本處理區(qū))
將步驟1提取的核酸、陽(yáng)性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品各取4μL,分別加入相應(yīng)的反應(yīng)管中,蓋好管蓋,混勻,短暫離心。
4. PCR 擴(kuò)增(核酸擴(kuò)增區(qū))
4.1將待檢測(cè)反應(yīng)管置于熒光定量PCR儀反應(yīng)槽內(nèi)。
4.2設(shè)置好通道、樣品信息,反應(yīng)體系設(shè)置為25μL;
熒光通道選擇: 檢測(cè)通道(Reporter Dye)FAM, 淬滅通道(Quencher Dye)NONE,ABI系列儀器請(qǐng)勿選擇ROX參比熒光,選擇None即可。
4.3推薦循環(huán)參數(shù)設(shè)置:
步驟循環(huán)溫度時(shí)間收集熒光信號(hào)
1 1 cycle 95℃ 10min 否
2 40 cycles
94℃ 15sec 否
55℃ 30sec 是
5. 結(jié)果分析判定
5.1結(jié)果分析條件設(shè)定
設(shè)置Baseline和Threshold:一般直接按機(jī)器自動(dòng)分析的結(jié)果分析,當(dāng)曲線出現(xiàn)整體傾斜時(shí),根據(jù)分析后圖像調(diào)節(jié) Baseline的start值(一般可在3~15范圍內(nèi)調(diào)節(jié))、stop值(一般可在5~20范圍內(nèi)調(diào)節(jié)),以及Threshold的Value值(上下拖動(dòng)閾值線至高于陰性對(duì)照),重新分析結(jié)果。
5.2結(jié)果判斷
陽(yáng)性:檢測(cè)通道Ct值≤35,且曲線有明顯的指數(shù)增長(zhǎng)曲線;
可疑:檢測(cè)通道35值≤38,建議重復(fù)檢測(cè),如果檢測(cè)通道仍為35值≤38,且曲線有明顯的增長(zhǎng)曲線,判定為陽(yáng)性,否則為陰性;
陰性:樣本檢測(cè)結(jié)果Ct值>38或無(wú)Ct值。
6. 質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)
陰性質(zhì)控品:Ct值>38或無(wú)Ct值;
陽(yáng)性質(zhì)控品:擴(kuò)增曲線有明顯指數(shù)生長(zhǎng)期,且Ct值≤32;
以上條件應(yīng)同時(shí)滿足,否則實(shí)驗(yàn)視為無(wú)效。
7. 檢測(cè)方法的局限性
1.樣本檢測(cè)結(jié)果與樣本收集、處理、運(yùn)送以及保存質(zhì)量有關(guān);
2.樣本提取過(guò)程中沒(méi)有控制好交叉污染,會(huì)出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果;
3.陽(yáng)性對(duì)照、擴(kuò)增產(chǎn)物泄漏,會(huì)導(dǎo)致假陽(yáng)性結(jié)果;
4.病原體在流行過(guò)程中基因突變、重組,會(huì)導(dǎo)致假陰性結(jié)果;
5.不同的提取方法存在提取效率差異,會(huì)導(dǎo)致假陰性結(jié)果;
6.試劑運(yùn)輸,保存不當(dāng)或試劑配制不準(zhǔn)確引起的試劑檢測(cè)效能下降,出現(xiàn)假陰性或定量檢測(cè)不準(zhǔn)確的結(jié)果;
7.本檢測(cè)結(jié)果僅供參考,如須確診請(qǐng)結(jié)合臨床癥狀以及其他檢測(cè)手段。
注意事項(xiàng):
1.所有操作嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行;
2.試劑盒內(nèi)各種組分使用前應(yīng)自然融化,混勻并短暫離心;
3.反應(yīng)液應(yīng)避光保存;
4.反應(yīng)中盡量避免氣泡存在,管蓋需蓋緊;
5.使用一次性吸頭、一次性手套和各區(qū)專用工作服;
6.樣本處理、試劑配制、加樣需在不同區(qū)進(jìn)行,以免交叉污染;
7.實(shí)驗(yàn)完畢后用10%次氯酸或75%酒精或紫外燈處理工作臺(tái)和移液器;
8.試劑盒里所有物品應(yīng)視為污染物對(duì)待,并按照《微生物生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室生物安全通則》進(jìn)行處理。