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大鼠肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白A(SP-A)試劑盒

更新時間:2024-07-05

簡要描述:

大鼠肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白A(SP-A)試劑盒采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)原理,從而判定標本中猴痘病毒抗體(SPV--Ab)的存在與否。

型號:96T/48T點擊量:425
品牌研尊生物貨號YZ-Y33496
規(guī)格96T/48T供貨周期現(xiàn)貨
主要用途僅供科研實驗應(yīng)用領(lǐng)域醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè),制藥

 

大鼠肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白ASP-A試劑盒ELISA)

使用說明書

  • 本試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿、組織勻漿及相關(guān)液體樣本大鼠肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白ASP-A)的含量。

  • 有效期:6個月

  • 保存條件:2-8℃

  • 本試劑盒僅供科研使用,不得用于臨床診斷

    實驗原理

    試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)。往預(yù)先包大鼠肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白ASP-A)捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經(jīng)過溫育并洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的大鼠肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白ASP-A)呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃度。

    樣本處理及要求

    1. 血清將收集于血清分離管的全血標本在室溫放置2小時或4過夜,然后1000×g離心20 分鐘,取上清即可,或?qū)⑸锨逯糜?/span>-20-80保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
    2. 血漿EDTA或肝素作為抗凝劑采集標本,并將標本在采集后的30分鐘內(nèi)于2-8 1000×g離心15分鐘,取上清即可檢測,或?qū)⑸锨逯糜?/span>-20-80保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
    3.  組織勻漿:用預(yù)冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織,去除殘留血液(勻漿中裂解的紅細胞會影響測量結(jié)果),稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應(yīng)體積的PBS(一般按1:9的重量體積比,比如1g的組織樣品對應(yīng)9mLPBS,具體體積可根據(jù)實驗需要適當(dāng)調(diào)整,并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑)加入玻璃勻漿器中,于冰上充分研磨。為了進一步裂解組織細胞,可以對勻漿液進行超聲破碎,或反復(fù)凍融。最后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘,取上清檢測。

    4.  細胞培養(yǎng)物上清或其它生物標本:1000×g離心20分鐘,取上清即可檢測,或?qū)⑸锨逯糜?/span>-20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

    注:標本溶血會影響最后檢測結(jié)果,因此溶血標本不宜進行此項檢測。

    需要而未提供的試劑和器材

  1. 酶標儀(450nm

  2. 高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL200-1000uL

  3. 37℃恒溫箱

  4. 蒸餾水或去離子水

    試劑盒組成

名稱

96孔配置

48孔配置

備注

微孔酶標板

12×8

12×4

標準品

0.3mL*6

0.3mL*6

樣本稀釋液

6mL

3mL

檢測抗體-HRP

10mL

5mL

20×洗滌緩沖液

25mL

15mL

按說明書進行稀釋

底物A

6mL

3mL

底物B

6mL

3mL

終止液

6mL

3mL

封板膜

2

2

說明書

1

1

自封袋

1

1


1.  標準品濃度依次為:200、10050、2512.5、6.25 pg/mL

2.  經(jīng)過大量正常標本檢驗,標本的正常濃度值均在試劑盒提供的檢測范圍內(nèi),實驗過程中直接取50μL樣本上樣即可。當(dāng)有部分樣本值超過最大標準品濃度時,可用樣本稀釋液將標本進行適當(dāng)稀釋后再進行實驗。

注意事項

  1. 嚴格按照規(guī)定的時間和溫度進行溫育以保證準確結(jié)果。所有試劑都必須在使用前達到室溫20-25℃。使用后立即冷藏保存試劑。

  2. 洗板不正確可以導(dǎo)致不準確的結(jié)果。在加入底物前確保盡量吸干孔內(nèi)液體。溫育過程中不要讓微孔干燥掉。

  3. 消除板底殘留的液體和手指印,否則影響OD值。

  4. 底物顯色液應(yīng)呈無色或很淺的顏色,已經(jīng)變藍的底物液不能使用。

  5. 避免試劑和標本的交叉污染以免造成錯誤結(jié)果。

  6. 在儲存和溫育時避免強光直接照射。

  7. 平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。

  8. 任何反應(yīng)試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發(fā)的強烈氣體。任何漂白成分都會破壞試劑盒中反應(yīng)試劑的生物活性。

  9. 不能使用過期產(chǎn)品。

  10. 如果可能傳播疾病,所有的樣品都應(yīng)管理好,按照規(guī)定的程序處理樣品和檢測裝置

    試劑準備

    試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡后方可使用。

    2洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按120稀釋,即120×洗滌緩沖液加19份蒸餾水。

    操作步驟

  11.  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃

  12.  設(shè)置標準品孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL

  13.  樣本孔待測樣本50μL;空白孔不加。

  14. 除空白孔外,標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應(yīng)孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

  15.  棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液350μL,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板5次(也可用洗板機洗板)。

  16.  每孔加入底物A、B50μL,37℃避光孵育15min

  17.  每孔加入終止液50μL,15min內(nèi),在450nm波長處測定各孔的OD值。

    實驗結(jié)果計算

    所測標準品的OD為橫坐標,標準品的濃度值為縱坐標,在坐標紙上或用相關(guān)軟件繪制標準曲線,并得到直線回歸方程,將樣品的OD值代入方程,計算出樣品濃度

    試劑盒性能

  18. 檢測范圍6.25 pg/mL 200 pg/mL。

  19. 靈敏度:zui低檢測濃度小于1.0 pg/mL。

  20. 特異性:不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。

  21. 重復(fù)性:板內(nèi)變異系數(shù)小于10% 板間變異系數(shù)小于15% 。

    大鼠肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白ASP-A試劑盒

    說明

    由于現(xiàn)有條件及科學(xué)技術(shù)水平尚不能對所有供貨商提供的所有原料進行全面的鑒定與分析,本產(chǎn)品可能存在一定的質(zhì)量技術(shù)風(fēng)險。

  22. 最終的實驗結(jié)果與試劑的有效性、實驗者的相關(guān)操作以及當(dāng)時的實驗環(huán)境密切相關(guān),請務(wù)必準備充足的標本備份。

  23. 不同批次的同一產(chǎn)品可能會有少許差別,如:檢測限、靈敏度以及顯色時間等,請依據(jù)試劑盒內(nèi)說明書進行實驗操作,網(wǎng)站電子版說明書僅作參考。

  24. 只有全部使用本試劑盒配套試劑才能保證檢測效果,不能混用其他制造商的產(chǎn)品。只有嚴格遵守本試劑盒的實驗說明才會得到最佳的檢測結(jié)果。

  25. 本公司只對試劑盒本身負責(zé),不對因使用該試劑盒所造成的樣本消耗負責(zé),請使用者使用前充分考慮到樣本的可能使用量,預(yù)留充足的樣本。

  26. 使用化學(xué)裂解液制備的組織勻漿或細胞提取液可能會由于某些化學(xué)物質(zhì)的引入導(dǎo)致ELISA實驗結(jié)果偏差。

  27. 若樣本為細胞培養(yǎng)上清,因該類樣本干擾因素較多,如:細胞狀態(tài)、細胞數(shù)量、采樣時間等,所以可能存在檢測不出的情況。

  28. 某些天然蛋白或重組蛋白,包括原核及真核重組蛋白,可能因為與本產(chǎn)品所使用的檢測抗體及捕獲抗體不匹配,而不被檢測出。

 

 

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TEL:18101607379

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